高效逆流色谱HPCCC常见概念（二）

1. 分离度（分辨率）                            

这种技术具有高分离性能的关键是它具有高固定相保留因子. 这对分离纯化的性能有什么影响呢？正如左边的谱图所示，好的固定相保留因子能获得好的分离度。我们可以看到固定相保留因子越高，实现的分离度越好。以前的高速逆流色谱仪HSCCC固定相保留因子最多也不过70%；而现在的高效逆流色谱仪HPCCC固定相保留因子一般都要高于 85%。

这主要带来两个好处。第一个好处是具有高固定相保留因子，扩大了两相溶剂体系的范围。这很容易理解，从非极性两相溶剂体系到极性两相溶剂体系固定相保留因子降低(即极性变强). 因此，在过去由于固定相保留因子太低，不能利用这个技术解决纯化分离遇到的问题

由于工业上在非极性范围一直采用反相高效液相色谱技术，这种技术并没有被采用。第二个好处关系到纯化分离的通量和速度。过去，尽管这项技术叫高速逆流色谱，但是名不符实。因为分离纯化时间经常是以小时计算而不是分钟。高的固定相保留因子允许在不损失分离度的状况下提高流动相流速。右边图示例子。现在的HPCCC，溶剂的极性范围扩大，使高通量的分离纯化能够实现。

2. 柱长的影响                                    

可以通过增加柱长来提高分离度，这一点与常规采用固体固定相色谱技术的不同。因为HPCCC 是一种低压分离技术，柱长不受限制。分离度与柱长倍数的平方根成正比（如，柱长为2倍时，相当于提高分离度为2的平方根，即1.4)。显然，柱长增加，分离时间也增加了，但是通量（产量）却不受影响，因为样品负载能力是柱体积的a %（在上面的例子，样品的负载加倍，但是分离时间也是加倍，因此生产能力保持不变）。所以产品研发阶段，可以先在小级别的设备上检验工艺条件是否合适。用户可以根据最重要的工艺参数（通量，产率和纯度），放大工艺条件，制作柱子。